SEQUENCE LISTING

<110> Ústav molekulárnej biológie SAV; Univerzita Komenského v Bratislave

<120> Antimicrobial protein, antimicrobial recombinant protein with lytic properties, expression vector, method of their preparation and use

<160> 4

<210> 1
<211> 489
<212> PRT
<213> Streptococcus agalactiae KMB-534

<220>
<223> Nucleotide and amino acid sequence of the EN534 endolysin gene (peg 1392) from Streptococcus agalactiae KMB-534 of size 489 AK and 1467 bp

<400> 1

atg gga aaa cat cta gtg att tgt gga cat ggg caa gga cgc act acc tat gat cca gga 
Met Gly Lys His Leu Val Ile Cys Gly His Gly Gln Gly Arg Thr Thr Tyr Asp Pro Gly
 1               5                  10                  15                  20
gca gtg aat agt aaa cgt ggc atc aca gaa gcc gga aag gtt cgt gag ttg gct aga ctc 
Ala Val Asn Ser Lys Arg Gly Ile Thr Glu Ala Gly Lys Val Arg Glu Leu Ala Arg Leu
 21              25                 30                   35                  40
atg tcc aag tac agc ggc aaa aac atc gat tat atc aca gac caa aat gtt tat gat tat 
Met Ser Lys Tyr Ser Gly Lys Asn Ile Asp Tyr Ile Thr Asp Gln Asn Val Tyr Asp Tyr 
 41             45                  50                   55                  60
aag tca ctg gca atc ctt ggt aag ggc tat gac tct gtt acc gag ctt cat ttc aat gcc 
Lys Ser Leu Ala Ile Leu Gly Lys Gly Tyr Asp Ser Val Thr Glu Leu His Phe Asn Ala 
61              65                   70                  75                 80
ttt aat ggc act gca cga gga acg gaa gtc ctc att caa tct tct ttg acg gct gat aag 
Phe Asn Gly Thr Ala Arg Gly Thr Glu Val Leu Ile Gln Ser Ser Leu Thr Ala Asp Lys 
81              85                   90                  95                 100
gag gat ttg gct att cta tct gtc ctt agc cgt cat ttc caa aac cgt ggg att aag aaa 
Glu Asp Leu Ala Ile Leu Ser Val Leu Ser Arg His Phe Gln Asn Arg Gly Ile Lys Lys 
101             105                 110                 115                 120 
gtg gat tgg ctc tat aat gcc aac gaa gct aag aac cgt ggg tac act tac cgc ttg gtg 
Val Asp Trp Leu Tyr Asn Ala Asn Glu Ala Lys Asn Arg Gly Tyr Thr Tyr Arg Leu Val
121             125                 130                 135                 140 
gag att gcc ttt att gat aac gaa gag gac atg act atc ttt gaa aat aag aag gaa gaa 
Glu Ile Ala Phe Ile Asp Asn Glu Glu Asp Met Thr Ile Phe Glu Asn Lys Lys Glu Glu 
141             145                 150                 155                 160
ctg gcc aaa ggt ctc gtc tct gct att acc caa gag gag gtg aag aca gtt gtc tct gcc 
Leu Ala Lys Gly Leu Val Ser Ala Ile Thr Gln Glu Glu Val Lys Thr Val Val Ser Ala 
161             165                 170                 175                 180  
acc ccc agt aag caa gga gga cag ccc cat gct tct acc agc cct gtt tat cac gtt ggg 
Thr Pro Ser Lys Gln Gly Gly Gln Pro His Ala Ser Thr Ser Pro Val Tyr His Val Gly
181             185                 190                 195                 200  
gat agt gtt cgt gtg ctt ggt cat gcg act cat tac caa acg ggt caa gcg atg gca agt 
Asp Ser Val Arg Val Leu Gly His Ala Thr His Tyr Gln Thr Gly Gln Ala Met Ala Ser
201             205                 210                 215                 220   
tgg gtc aaa ggt cgc acc tac aaa atc ctc caa gtc aaa gcc gta aac caa tct cgt agt 
Trp Val Lys Gly Arg Thr Tyr Lys Ile Leu Gln Val Lys Ala Val Asn Gln Ser Arg Ser 
221             225                 230                 235                 240
aag aga gcc tac tta ctt gaa ggg att aca tct tgg gta ctg gaa cag gat gtg gaa gga 
Lys Arg Ale Tyr Leu Leu Glu Gly Ile Thr Ser Trp Val Leu Glu Gln Asp Val Glu Gly
241             245                 250                 255                 260  
acc agc ctt ggt cat tca gaa cag acc tat acg gct caa aag gga gat agc tat tgg cga 
Thr Ser Leu Gly His Ser Glu Gln Thr Tyr Thr Ala Gln Lys Gly Asp Ser Tyr Trp Arg
261             265                 270                 275                 280 
att gca cga aaa tct ggg aca acg gtt gat ggt ctt tta gcc ttg aat ggt ttg aag aaa 
Ile Ala Arg Lys Ser Gly Thr Thr Val Asp Gly Leu Leu Ala Leu Asn Gly Leu Lys Lys
281             285                 290                 295                 300 
acc gat gtc tta aag att ggt caa acc ttg aaa gtc cat aag gcg acg agt tcc atc aaa 
Thr Asp Val Leu Lys Ile Gly Gln Thr Leu Lys Val His Lys Ala Thr Ser Ser Ile Lys
301             305                 310                 315                 320  
gca gta gca aca agt ctt gcc caa cgc gcg gtt gct tca gca ctg tct aaa gtt ggt cag 
Ala Val Ala Thr Ser Leu Ala Gln Arg Ala Val Ala Ser Ala Leu Ser Lys Val Gly Gln
321             325                 330                 335                 340  
aaa gtg act gtt cct acc aac cct tat ggt gga caa tgc gtc agt ctg gtg gat aag att 
Lys Val Thr Val Pro Thr Asn Pro Tyr Gly Gly Gln Cys Val Ser Leu Val Asp Lys Ile 
341             345                 350                 355                 360 
gtg cag gag ttg acc gac aag gac atg gca tac acc aat gcc atc gat tgt tta acc aag 
Val Gln Glu Leu Thr Asp Lys Asp Met Ala Tyr Thr Asn Ala Ile Asp Cys Leu Thr Lys 
361             365                 370                 375                 380
gcg aaa gct aac ggc ttt aca gtc att aag gac gct tgg ggc gtt aac cct aaa gct ggt 
Ala Lys Ala Asn Gly Phe Thr Val Ile Lys Asp Ala Trp Gly Val Asn Pro Lys Ala Gly 
381             385                 390                 395                 400
gac ttc tat gtt att aag aca gac agt cat cct tat ggt cac atc ggc att tgt atc aca 
Asp Phe Tyr Val Ile Lys Thr Asp Ser His Pro Tyr Gly His Ile Gly Ile Cys Ile Thr
401             405                 410                 415                 420 
gat tca gat ggt aca agc att gat ggg gtt gag cag aat gtc gat ggc tac tct gac cac 
Asp Ser Asp Gly Thr Ser Ile Asp Gly Val Glu Gln Asn Val Asp Gly Tyr Ser Asp His  
421             425                 430                 435                 440
aac aag aac ggt atc aat gac caa ctg gaa att ggt ggt ggc ggt att acc cgt cga gtg 
Asn Lys Asn Gly Ile Asn Asp Gln Leu Glu Ile Gly Gly Gly Gly Ile Thr Arg Arg Val
441             445                 450                 455                 460 
aag cgt gtc tgg atg gca gat ggc tca ctt tat gat gcg act ggc acc gtc aaa ctt gga 
Lys Arg Val Trp Met Ala Asp Gly Ser Leu Tyr Asp Ala Thr Gly Thr Val Lys Leu Gly
461             465                 470                 475                 480 
aaa gtt atc ggt tgg ttc aga tta gga 
Lys Val Ile Gly Trp Phe Arg Leu Gly -  
481             485                


<210> 2
<211> 504
<212> PRT
<213> Streptococcus agalactiae KMB-534

<220>
<223> Nucleotide and amino acid sequence of recombinant endolysin EN534-C 
Domain sequences in AK: Amidase 3: L5 – I169; binding domain LysM: Y270 – V312; CHAP: G351 – N433; His-Tag: H499- H504, 504 AK, 1512 bp


<400> 2

atg gga aaa cat cta gtg att tgt gga cat ggg caa gga cgc act acc tat gat cca gga 
Met Gly Lys His Leu Val Ile Cys Gly His Gly Gln Gly Arg Thr Thr Tyr Asp Pro Gly
1                5                   10                 15                   20
gca gtg aat agt aaa cgt ggc atc aca gaa gcc gga aag gtt cgt gag ttg gct aga ctc 
Ala Val Asn Ser Lys Arg Gly Ile Thr Glu Ala Gly Lys Val Arg Glu Leu Ala Arg Leu
21               25                  30                 35                   40
atg tcc aag tac agc ggc aaa aac atc gat tat atc aca gac caa aat gtt tat gat tat 
Met Ser Lys Tyr Ser Gly Lys Asn Ile Asp Tyr Ile Thr Asp Gln Asn Val Tyr Asp Tyr 
41              45                   50                 55                   60
aag tca ctg gca atc ctt ggt aag ggc tat gac tct gtt acc gag ctt cat ttc aat gcc 
Lys Ser Leu Ala Ile Leu Gly Lys Gly Tyr Asp Ser Val Thr Glu Leu His Phe Asn Ala 
61              65                   70                 75                   80
ttt aat ggc act gca cga gga acg gaa gtc ctc att caa tct tct ttg acg gct gat aag 
Phe Asn Gly Thr Ala Arg Gly Thr Glu Val Leu Ile Gln Ser Ser Leu Thr Ala Asp Lys 
81              85                   90                 95                  100
gag gat ttg gct att cta tct gtc ctt agc cgt cat ttc caa aac cgt ggg att aag aaa 
Glu Asp Leu Ala Ile Leu Ser Val Leu Ser Arg His Phe Gln Asn Arg Gly Ile Lys Lys 
101             105                 110                 115                 120 
gtg gat tgg ctc tat aat gcc aac gaa gct aag aac cgt ggg tac act tac cgc ttg gtg 
Val Asp Trp Leu Tyr Asn Ala Asn Glu Ala Lys Asn Arg Gly Tyr Thr Tyr Arg Leu Val
121             125                 130                 135                 140 
gag att gcc ttt att gat aac gaa gag gac atg act atc ttt gaa aat aag aag gaa gaa 
Glu Ile Ala Phe Ile Asp Asn Glu Glu Asp Met Thr Ile Phe Glu Asn Lys Lys Glu Glu 
141             145                 150                 155                 160
ctg gcc aaa ggt ctc gtc tct gct att acc caa gag gag gtg aag aca gtt gtc tct gcc 
Leu Ala Lys Gly Leu Val Ser Ala Ile Thr Gln Glu Glu Val Lys Thr Val Val Ser Ala 
161             165                 170                 175                 180  
acc ccc agt aag caa gga gga cag ccc cat gct tct acc agc cct gtt tat cac gtt ggg 
Thr Pro Ser Lys Gln Gly Gly Gln Pro His Ala Ser Thr Ser Pro Val Tyr His Val Gly
181             185                 190                 195                 200  
gat agt gtt cgt gtg ctt ggt cat gcg act cat tac caa acg ggt caa gcg atg gca agt 
Asp Ser Val Arg Val Leu Gly His Ala Thr His Tyr Gln Thr Gly Gln Ala Met Ala Ser
201             205                 210                 215                 220   
tgg gtc aaa ggt cgc acc tac aaa atc ctc caa gtc aaa gcc gta aac caa tct cgt agt 
Trp Val Lys Gly Arg Thr Tyr Lys Ile Leu Gln Val Lys Ala Val Asn Gln Ser Arg Ser 
221             225                 230                 235                 240
aag aga gcc tac tta ctt gaa ggg att aca tct tgg gta ctg gaa cag gat gtg gaa gga 
Lys Arg Ale Tyr Leu Leu Glu Gly Ile Thr Ser Trp Val Leu Glu Gln Asp Val Glu Gly
241             245                 250                 255                 260  
acc agc ctt ggt cat tca gaa cag acc tat acg gct caa aag gga gat agc tat tgg cga 
Thr Ser Leu Gly His Ser Glu Gln Thr Tyr Thr Ala Gln Lys Gly Asp Ser Tyr Trp Arg
261             265                 270                 275                 280 
att gca cga aaa tct ggg aca acg gtt gat ggt ctt tta gcc ttg aat ggt ttg aag aaa 
Ile Ala Arg Lys Ser Gly Thr Thr Val Asp Gly Leu Leu Ala Leu Asn Gly Leu Lys Lys
281             285                 290                 295                 300 
acc gat gtc tta aag att ggt caa acc ttg aaa gtc cat aag gcg acg agt tcc atc aaa 
Thr Asp Val Leu Lys Ile Gly Gln Thr Leu Lys Val His Lys Ala Thr Ser Ser Ile Lys
301             305                 310                 315                 320  
gca gta gca aca agt ctt gcc caa cgc gcg gtt gct tca gca ctg tct aaa gtt ggt cag 
Ala Val Ala Thr Ser Leu Ala Gln Arg Ala Val Ala Ser Ala Leu Ser Lys Val Gly Gln
321             325                 330                 335                 340  
aaa gtg act gtt cct acc aac cct tat ggt gga caa tgc gtc agt ctg gtg gat aag att 
Lys Val Thr Val Pro Thr Asn Pro Tyr Gly Gly Gln Cys Val Ser Leu Val Asp Lys Ile 
341             345                 350                 355                 360 
gtg cag gag ttg acc gac aag gac atg gca tac acc aat gcc atc gat tgt tta acc aag 
Val Gln Glu Leu Thr Asp Lys Asp Met Ala Tyr Thr Asn Ala Ile Asp Cys Leu Thr Lys 
361             365                 370                 375                 380
gcg aaa gct aac ggc ttt aca gtc att aag gac gct tgg ggc gtt aac cct aaa gct ggt 
Ala Lys Ala Asn Gly Phe Thr Val Ile Lys Asp Ala Trp Gly Val Asn Pro Lys Ala Gly 
381             385                 390                 395                 400
gac ttc tat gtt att aag aca gac agt cat cct tat ggt cac atc ggc att tgt atc aca 
Asp Phe Tyr Val Ile Lys Thr Asp Ser His Pro Tyr Gly His Ile Gly Ile Cys Ile Thr
401             405                 410                 415                 420 
gat tca gat ggt aca agc att gat ggg gtt gag cag aat gtc gat ggc tac tct gac cac 
Asp Ser Asp Gly Thr Ser Ile Asp Gly Val Glu Gln Asn Val Asp Gly Tyr Ser Asp His  
421             425                 430                 435                 440
aac aag aac ggt atc aat gac caa ctg gaa att ggt ggt ggc ggt att acc cgt cga gtg 
Asn Lys Asn Gly Ile Asn Asp Gln Leu Glu Ile Gly Gly Gly Gly Ile Thr Arg Arg Val
441             445                 450                 455                 460 
aag cgt gtc tgg atg gca gat ggc tca ctt tat gat gcg act ggc acc gtc aaa ctt gga 
Lys Arg Val Trp Met Ala Asp Gly Ser Leu Tyr Asp Ala Thr Gly Thr Val Lys Leu Gly
461             465                 470                 475                 480 
aaa gtt atc ggt tgg ttc aga tta gga gtc gac aag ctt gcg gcc gca ctc gag cac cac
Lys Val Ile Gly Trp Phe Arg Leu Gly Val Asp Lys Leu Ala Ala Ala Leu Glu His His
481             485                 490                 495                 500
cac cac cac cac
His His His His
501         504


<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> primer to Streptococcus agalactiae KMB-534

<220>
<223> EN 534_Ami3 F

<400> 3

ataccatgggaaaacatctagtga		24


<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> primer to Streptococcus agalactiae KMB-534

<220>
<223> EN 534_Ami3 R

<400> 4

cttgtcgactcctaatctgaaccaa		25  