Listado de secuencias
<110> Universidad de Chile e INNOVACOLD
<120> Enzima recombinante con actividad poligalacturonasa altamente eficiente a  temperaturas en un rango de 5C-15C, secuencia nucleotidica sinttica que la codifica y mtodo de obtencin de dicha enzima mediante cepas transformantes de  levadura Pichia pastori.
<160> 12
<210> 1
<211> 369
<212> amino cidos
<213> obtenida de Articulospora proliferata 

<220>
<221> poligalacturonasa
<222> (1)(369)
<223> enzima recombinante con actividad poligalacturonasa  altamente eficiente a  temperaturas entre 5C-15C obtenida de Articulospora proliferata

<400> 1
Met	Val	Gln	Leu	Ser	Thr	Phe	Leu	Ser	Ile 
1				5					10
Ala	Ser	Ser	Ala	Ala	Leu	Val	Ala	Ala	Ala
				15					20
Pro	Thr	Val	Ser	Ser	Leu	Glu	Ala	Arg	Ala
				25					30
 Ala	Cys	Thr	Phe	Ser	Gly	Ala	Thr	Gly	Ala
				35					40
Ala	Asp	Ala	Leu	Lys	Asn	Lys	Ala	Ser	Cys
				45					50
Ser	Ser	Ile	Thr	Leu	Asn	Asn	Leu	Val	Val
				55					60		
Pro	Ala	Gly	Thr	Thr	Leu	Asn	Leu	Glu	Asn
				65					70			
Leu	Lys	Ala	Gly	Thr	Ser	Val	Ile	Phe	Ser 
				75					80
Gly	Thr	Thr	Thr	Phe	Gly	Tyr	Lys	Glu	Try
				85					90
Ala	Gly	Pro	Leu	Val	Ser	Ile	Ser	Gly	Thr
				95					100	
Asn	Ile	His	Ile	Ser	Gly	Ala	Ala	Gly	Asn
				105					110
Leu	Ile	Asp	Ala	Asn	Gly	Ala	Arg	Try	Try
				115					120
Asp	Thr	Lys	Gly	Ser	Asn	Gly	Gly	Lys	Thr
				125					130
Lys	Pro	Lys	Phe	Phe	Ala	Ala	His	Lys	Leu
				135					140
Ile	Thr	Ser	Thr	lIe	Asp	Gly	Leu	Asn	Phe
				145					150
Asp	Asp	Ser	Pro	Ile	Gln	Leu	Met	Ser	Ile 
				155					160
Asn	Gln	Cys	Gln	Gly	Leu	Thr	Val	Asn 	Lys	
				165					170
Val 	Thr	Met	Asn	Asn	Val	Ala	Gly	Asp	Thr	
				175					180
Lys 	Gly	Gly	His	Asn	Thr	Asp	Ala	Phe	Asp	
				185					190
Val 	Gly	Asp	Ser	Ser	Asp	Ile	Tyr	Ile	Ser	
				195					200
Gly 	Ala	Val	Val	Gln	Asn	Gln	Asp	Asp	Cys	
				205					210
Leu 	Ala	Ile	Asn	Ser	Gly	Thr	Asn	Ile	Thr		
				215					220
Phe 	Thr 	Gly	Gly	Ser	Cys	Ser	Gly	Gly	His	
				225					230
Gly	Leu	Ser	Ile	Gly	Ser	Val	Gly	Asn	Arg	
				235					240
Ser	Asn	Asn 	Val	Val	Lys	Thr	Val	Arg	lIe			
245					250
Leu	Ser	Ser	Thr	Ile	Lys	Asn	Ser	Asp	Asn	
				255					260
Gly	Val	Arg 	Ile	Lys	Thr	Ile	Glu	Gly	Ala							265					270
Thr	Gly	Ser	Val	Ser	Asp	Ile	Val	Tyr	Lys							275					280
Glu	Ile	Thr	Leu	Val	Asn	Ile	Ala	Lys	Tyr	
				285					290
Gly	Val	Val	Ile	Gln	Gln	Asp	Tyr	Asn	Asn
				295					300
Gly	Ser	Pro	Ser	Gly	Asn	Pro	Tyr	Tyr	Gly
				305					310
Val	Pro	Ile	Tyr	Ser	Leu	Tyr	Leu	Asp	Asn
				315					320
Val	His	Gly	Tyr	Val	Ala	Ala	Lys	Gly	Tyr
				325					330
Asn	Ile	Tyr	Leu	Leu	Cys	Gly	Ser	Gly	Ser
				335					340
Cys	Ser	Lys	Try	Thr	Tyr	Asn	Lys	Val	Ala
				345					350
Val	Tyr	Gly	Gly	Lys	Lys	Asn	Tyr	Ala	Cys
				355					360
Lys	Asn	Phe	Pro	Ser	Pro	Ala	Ser	Cys
				365

<210> 2
<211> 350
<212> amino cidos
<213> obtenida de Articulospora proliferata 

<220>
<221> poligalacturonasa sin pptido seal (19 primeros amino cidos de SEQ ID No.:1)
<222> (1)(350)
<223> enzima recombinante con actividad poligalacturonasa sin pptido seal altamente eficiente a  temperaturas entre 5C-15C obtenida de Articulospora proliferata

<400> 2
Ala 	Pro	Thr	Val	Ser	Ser	Leu	Glu	Ala	Arg	
				5					10
Ala 	Ala	Cys	Thr	Phe	Ser	Gly	Ala	Thr	Gly
				15					20
Ala 	Ala	Asp	Ala	Leu	Lys	Asn	Lys	Ala	Ser
				25					30
Cys 	Ser	Ser	Ile	Thr	Leu	Asn	Asn	Leu	Val
				35					40
Val 	Pro	Ala	Gly	Thr	Thr	Leu	Asn	Leu	Glu
				45					50		
Asn 	Leu	Lys	Ala	Gly	Thr	Ser	Val	Ile	Phe
				55					60			
Ser 	Gly	Thr	Thr	Thr	Phe	Gly	Tyr	Lys	Glu	
				65					70
Try 	Ala	Gly	Pro	Leu	Val	Ser	Ile	Ser	Gly
				75					80
Thr 	Asn	Ile	His	Ile	Ser	Gly	Ala	Ala	Gly	
				85					90	
Asn 	Leu	Ile	Asp	Ala	Asn	Gly	Ala	Arg	Try	
				95					100
Try 	Asp	Thr	Lys	Gly	Ser	Asn	Gly	Gly	Lys	
				105					110
Thr 	Lys	Pro	Lys	Phe	Phe	Ala	Ala	His	Lys
				115					120
Leu 	Ile	Thr	Ser	Thr	lIe	Asp	Gly	Leu	Asn
				125					130
Phe	 Asp	Asp	Ser	Pro	Ile	Gln	Leu	Met	Ser
				135					140
Ile 	Asn	Gln	Cys	Gln	Gly	Leu	Thr	Val	Asn
				145					150
Lys	Val 	Thr	Met	Asn	Asn	Val	Ala	Gly	Asp
				155					160
Thr	Lys 	Gly	Gly	His	Asn	Thr	Asp	Ala	Phe
				165					170
Asp	Val 	Gly	Asp	Ser	Ser	Asp	Ile	Tyr	Ile
				175					180
Ser	Gly 	Ala	Val	Val	Gln	Asn	Gln	Asp	Asp
				185					190
Cys	Leu 	Ala	Ile	Asn	Ser	Gly	Thr	Asn	Ile
				195					200
Thr	Phe 	Thr 	Gly	Gly	Ser	Cys	Ser	Gly	Gly	
				205					210
His	Gly	Leu	Ser	Ile	Gly	Ser	Val	Gly	Asn
				215					220
Arg	Ser	Asn	Asn 	Val	Val	Lys	Thr	Val	Arg
				225					230
lIe	Leu	Ser	Ser	Thr	Ile	Lys	Asn	Ser	Asp
235					240
Asn	Gly	Val	Arg 	Ile	Lys	Thr	Ile	Glu	Gly
				245					250
Ala 	Thr	Gly	Ser	Val	Ser	Asp	Ile	Val	Tyr
				255					260
Lys	Glu	Ile	Thr	Leu	Val	Asn	Ile	Ala	Lys
				265					270
Tyr	Gly	Val	Val	Ile	Gln	Gln	Asp	Tyr	Asn
				275					280
Asn 	Gly	Ser	Pro	Ser	Gly	Asn	Pro	Tyr	Tyr
				285					290
Gly	 Val	Pro	Ile	Tyr	Ser	Leu	Tyr	Leu	Asp
				295					300
Asn 	Val	His	Gly	Tyr	Val	Ala	Ala	Lys	Gly
				305					310
Tyr 	Asn	Ile	Tyr	Leu	Leu	Cys	Gly	Ser	Gly
				315					320
Ser 	Cys	Ser	Lys	Try	Thr	Tyr	Asn	Lys	Val
				325					330
Ala 	Val	Tyr	Gly	Gly	Lys	Lys	Asn	Tyr	Ala
				335					340
Cys 	Lys	Asn	Phe	Pro	Ser	Pro	Ala	Ser 	Cys
				345					350

<210> 3
<211> 1107
<212> DNA
<213> cDNA que codifica enzima recombinante con actividad poligalacturonasa de secuencia SEQ ID No.:1, incluye intrones

<220>
<221> DNA
<222> (1)(1107)
<223> cDNA que codifica enzima recombinante con actividad poligalacturonasa de secuencia SEQ ID No.:1

<400>3
		
atggttcaac	tctccacctt	cttgagcatc	gcctcatccg	cagctctggt	50

agctgctgca	ccaaccgttt	cttctctcga	agcaagagct	gcttgcactt	100

tctccggtgc	aactggtgct	gctgatgccc	tcaagaacaa	agcgtcttgc	150

tcttctatca	ctttgaacaa	tctcgttgtc	ccagccggca	cgactctcaa	200

ttgaaggctg	ttgaaggctg	gtacatccgt	catcttctca	ggtactacga	250

cctttggtta	caaagaatgg	gctggacctc	tggtctctat	ctcaggcacc	300

aacattcaca	tcagcggcgc	tgccggcaac	ctgatcgatg	ctaacggcgc	350

aagatggtgg	gataccaagg	gctccaacgg	tggcaagact	aagccaaagt	400

tcttcgccgc	cccaagtta	attacttcca	caatcgacgg	gttgaacttc	450

aaggactctc	caatccagct	tatgagcatc	aaccaatgcc	aaggactgac	500

cgtcaacaag	gtcaccatca	acaacgttgc	tggtgacacc	aagggcggcc	550

acaacactga	cgcctttgat	gttggxgatt	cttcggatat	ttacatctct	600

ggagctgtgg	tgcagaacca	agacgattgc	cttgccatta	acagcggaac	650

aaacatcacc	tttaccggcg	ggagctgcag	cggtggccat	ggtctttcca	700

tcggctctgt	aggcaaccga	agcaacaarg	tcgtgaagac	tgtxxgtatc	750

ctgagctcta	ccatcaagaa	ctcggacaac	ggtgttcgca	tcaagactat	800

cgagggtgct	accggctcgg	tctctgacat	tgtgtacaag	gacatcacgc	850

ttgtcaatat	tgccaagtat	ggtgttgtta	ttcagcaag	ttacaacaac	900

gctccccat	ctggaaaccc	cactaccggt	gttcccatca	ccagcctcac	950

actcgacaac	gtccacggaa	ctgttgctgc	aaagggtaca	aacatcatc	1000

tgctttgtgg	atctggaagc	tgcagcaagt	ggacctggaa	caaggttgct	1050

gtcactggtg	gcaagaagag	tactgcttgc	aagaacttcc	cttccccagc	1100

ctcctgc


<210> 4
<211> 1066
<212> DNA
<213> secuencia nucleotidica para clonamiento

<220>
<221> DNA
<222> (1)(1066)
<223> secuencia nucleotidica para clonamiento

<400> 4

gagtccatag	gcacctacag		tctcatcatt	ggaagccaga	gcagcatgca	50

cattctcagg	agcaacagga	gccgcccacg	ccttgaaaaa	caaagcatct	100

tgttcttcca	ttactttgaa		caatttggtt	gttccagctg	gtactacatt	150

gaacttggaa	aatttgaagg		ctggaacttc	tgttattttc	tctggtacta	200

caactttcgg	atacaaggag		tgggctggtg	ctttggtttc	tatctccgga	250

actaacattc	atatctctgg		tgctgctgga	aacttcattg	atgctaatgg	300

tgctagatgg	tgggacacaa		aaggatctaa	cggtggaaag	actaaaccaa	350

agtttttcgc	tgctcacaaa		ttgattacat	ccactatcga	tggtttgaac	400

ttcaaggact	ctcctatcca		attgatgtcc	atcaaccaat	gtcagggttt	450

gacagttaac	aaggttacta		tgaacaatgt	tgctggagat	acaaagggtg	500

gacataacag	tgatgctttt		gacgttgag	attcttctga	catctacatc	550

tcaggagctg	ttgttcaaaa		tcaggatgac	tggtttggcta	tcaactctgg	600

tactaatatt	acattcactg		gtggatcatg	ttctggtgga	cacggattgt	650

caattggttc	tgttggaaac		agatccaaca	acgttgttaa	gacagttaga	700

atcttgtcct	caactatcaa		aaactcagat	aacggtgtta	gaattaagac	750

aatcgaaggt	gctactggat		ccgtttcaga	tatcgtttac	aaggacatca	800

ctttggttaa	cattgctaag		tacggtgttg	ttatccaaca	ggattataac	850

aatggtctc	catccggaaa		tcctacaact	ggtgttccaa	ttacattcttt	900

gactttggac	aacgttcatg		gtacagttgc	tgctaaggga	actaatatct	950

acttgttgtg	tggttcagga		tcttgttcca	aatggacttg	gaataaggtt	1000

gccgtcactg	gtggtaaaaa		gtcaaccgcc	tgcaagaatt	tcccatcccc	1050

tgttcctgc	ggtacc		



<210> 5
<211> 1050
<212> Fragmento DNA 
<213>cDNA que codifica enzima con actividad poligalacturonasa de secuencia SEQ ID No.:2

<220>
<221> DNA
<222> (1)(1050)
<223> cDNA que codifica enzima con poligalacturonasa de secuencia SEQ ID No.:2

<400> 5
		
gcaccaaccg	tttcttctct	cgaagcaaga	gctgcttgca	ctttctccgg	50

tgcaactggt	gctgctgatg	ccctcaagaa	caaagcgtct	tgctcttcta	100

tcactttgaa	caatctcgtt	gtcccagccg	gcacgactct	caattgaagg	150

ctgttgaagg	ctggtacatc	cgtcatcttc	tcaggtacta	cgacctttgg	200

ttacaaagaa	tgggctggac	ctctggtctc	tatctcaggc	accaacattc	250

acatcagcgg	cgctgccggc	aacctgatcg	atgctaacgg	cgcaagatgg	300

tgggatacca	agggctccaa	cggtggcaag	actaagccaa	agttcttcgc	350

cgccccaag	ttaattactt	ccacaatcga	cgggttgaac	ttcaaggact	400

ctccaatcca	gcttatgagc	atcaaccaat	gccaaggact	gaccgtcaac	450

aaggtcacca	tcaacaacgt	tgctggtgac	accaagggcg	gccacaacac	500

tgacgccttt	gatgttggxg	attcttcgga	tatttacatc	tctggagctg	550

tggtgcagaa	ccaagacgat	tgccttgcca	ttaacagcgg	aacaaacatc	600

acctttaccg	gcgggagctg	cagcggtggc	catggtcttt	ccatcggctc	650

tgtaggcaac	cgaagcaaca	argtcgtgaa	gactgtxxgt	atcctgagct	700

ctaccatcaa	gaactcggac	aacggtgttc	gcatcaagac	tatcgagggt	750

gctaccggct	cggtctctga	cattgtgtac	aaggacatca	cgcttgtcaa	800

tattgccaag	tatggtgttg	ttattcagc	aagttacaac	aacgctccc	850

catctggaaa	ccccactacc	ggtgttccca	tcaccagcct	cacactcgac	900

aacgtccacg	gaactgttgc	tgcaaagggt	acaaacatc	atctgctttg	950

tggatctgga	agctgcagca	agtggacctg	gaacaaggtt	gctgtcactg	1000

gtggcaagaa	gagtactgct	tgcaagaact	tcccttcccc	agcctcctgc	1050

<210> 6
<211> 1054
<212> Fragmento DNA 
<213>cDNA que codifica enzima con actividad poligalacturonasa de secuencia SEQ ID No.:2

<220>
<221> DNA
<222> (1)(1050)
<223> cDNA que codifica enzima con poligalacturonasa de secuencia SEQ ID No.:2

<400> 6

gcaccaaccg	tttcttctct	cgaagcaaga	gctgcttgca	ctttctccgg	50

tgcaactggt	gctgctgatg	ccctcaagaa 	caaagcgtct 	tgctcttcta 	100

tcactttgaa	caatctcgtt	gtcccagccg	gcacgactct	caacctggag	150

aacttgaagg	ctggtacatc	cgtcatcttc	tcaggtacta	cgacctttgg	200

ttacaaagaa	tgggctggac	ctctggtctc	tatctcaggc	accaacattc	250

acatcagcgg	cgctgccggc	aacctgatcg	atgctaacgg	cgcaagatgg	300

tgggatacca	agggctccaa	cggtggcaag	actaagccaa	agttcttcgc	350

cgcccacaag	ttaattactt	ccacaatcga	cgggttgaac	ttcaaggact	400

ctccaatcca	gcttatgagc	atcaaccaat	gccaaggact	gaccgtcaac	450

aaggtcacca	tgaacaacgt	tgctggtgac	accaagggcg	gccacaacac	500

tgacgccttt	gatgttggcg	attcttcgga	tatttacatc	tctggagctg	550

tggtgcagaa	ccaagacgat	tgccttgcca	ttaacagcgg	aacaaacatc	600

acctttaccg	gcgggagctg	cagcggtggc	catggtcttt	ccatcggctc	650

tgtaggcaac	cgaagcaaca	atgtcgtgaa	gactgtccgt	atcctgagct	700

ctaccatcaa	gaactcggac	aacggtgttc	gcatcaagac	tatcgagggt	750

gctaccggct	cggtctctga	cattgtgtac	aaggacatca	cgcttgtcaa	800

tattgccaag	tatggtgttg	ttattcagca	agattacaac	aacggctccc	850

catctggaaa	ccccactacc	ggtgttccca	tcaccagcct	cacactcgac	900

aacgtccacg	gaactgttgc	tgcaaagggt	acaaacatct	acctgctttg	950

tggatctgga	agctgcagca	agtggacctg	gaacaaggtt	gctgtcactg	1000

gtggcaagaa	gagtactgct	tgcaagaact	tcccttcccc	agcctcctgc	1050


<210> 7
<211> 12
<212> amino cidos

<220>
<221> fragmento poligalacturonasa
<222> (1)(12)
<223> fragmento de enzima

<400> 7
Val	Ile	Phe	Ser	Gly	Thr	Thr	Thr	Phe	Gly
				5					10
Tyr	Lys	

<210> 8
<211> 11
<212> amino cidos

<220>
<221> fragmento poligalacturonasa
<222> (1)(11)
<223> fragmento de enzima

<400> 8
Ser	Gly	Ala	Val	Val	Gln	Asn	Gln	Asp	Asp	
				5					10
Cys

<210> 10
<211> 10
<212> cido nucleico

<220>
<221> sitio partidor para clivaje en terminal 5 terminus con enzima de restriccin Myl
<222> (1)(10)
<223> cido nucleico

<400> 10
ggagtccatcg	10


<210> 11
<211> 6
<212> cido nucleico

<220>
<221> secuencia nucleotide agregada a terminal 3, segundo sitio de clivaje para la enzima de restriccin KpnI
<222> (1)(6)
<223> cido nucleico

<400> 11
ggtacc	

<210> 12
<211> 21
<212> cido nucleico

<220>
<221> partidor pectfwd
<222> (1)(21)
<223> cido nucleico

<400> 12
gcacctacag	tctctcatct	g	21


<210> 13
<211> 21
<212> cido nucleico

<220>
<221> partidor pectnev
<222> (1)(21)
<223> cido nucleico

<400> 12
gcaggaagca	ggggatggga	a	21
